【摘要】 目的 建立評價高良薑藥材質量的含量測定方法。方法 採用DiamonsilTMC18柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流動相為乙腈?0.2%磷酸溶液，梯度洗脫，流速1 mL/min，柱溫30 ℃，檢測波長為220 nm。結果：高良薑素、山柰素?4′?甲醚、5?羥基?7?(4?羥基?3?甲氧苯基)?1?苯?3?庚酮、5?羥基?1,7?雙苯?3?庚酮的線性範圍分別為0.267～1.328 μg、0.103 4～0.517 μg、0.310 8～1.554 0 μg、0.247 3～1.236 μg，平均回收率分別為100.9%、97.0%、96.8%、99.0%，RSD值分別為1.7%、1.4%、1.8%、0.6%。結論 該方法準確、簡便，具有良好的重複性和穩定性，可用於高良薑藥材的質量控制。
【關鍵詞】 高良薑;高效液相色譜法;黃酮;庚烷;質量控制
Abstract:Objective To develop an HPLC method for characterizing the active constituents, namely, galangin, kaempferol?4?methyl ether, diphenylheptane A and diphenylheptane C, in Alpinia officinarum Hance. Method Samples were analyzed on an HPLC Diamonsil C18 column(200 mm×4.6 mm，5 μm) by using gradient elution of acetonitrile (A) and 0.2% aqueous phosphoric acid (B) at a flow rate of 1.0 mL· diode?array detection was set at 220 nm. Results Galangin, kaempferol?4?methyl ether, diphenylheptane A and diphenylheptane C had good linearity over the ranges of 0.267-1.328，0.1034-0.517， 0.3108-1.554 and 0.2473-1.236 μg， respectively, and the average recoveries were 100.9%(RSD=1.7%)、97.0%(RSD=1.4%)，96.8% (RSD=1.8%) and 99.0%(RSD=0.6%)，lusionThe method is rapid，accurate and reproducible, which is helpful in the quality control of Alpinia officinarum Hance.
Key words:Alpinia officinarum Hance;HPLC;flavonoids;diarylheptanoids;quality evaluation
高良薑為姜科山姜屬植物高良薑Alpinia officinarum Hance的乾燥根莖，其性熱味辛，歸脾、胃經,具溫胃散寒、消食止痛的功效，用於脘腹冷痛、胃寒嘔吐、噯氣吞酸等[1]。高良薑黃酮和庚烷均具有調節鈣離子釋放、抗氧化應激、抗炎、調節免疫、抗病原微生物、抑制平滑肌刺激收縮、鎮痛止嘔等藥理作用[2～5]。高良薑含有十多種黃酮類成分[6]和十多種二苯基庚烷類物質[7]，其中高良薑素、山柰素?4′?甲醚、5?羥基?7?(4?羥基?3?甲氧苯基)?1?苯?3?庚酮 (DPHA)、5?羥基?1,7?雙苯?3?庚酮 (DPHC)含量比較高，因此本文選擇這4個成分作為監控指標，採用HPLC法同時測定不同批號和來源的高良薑藥材中的以上的2種黃酮類成分和2種庚烷類成分的含量，為全面準確控制藥材質量提供了可行的依據。
1、儀器、試劑與材料
Waters2695/2996高效液相色譜儀，Empower工作站; BP210D型電子分析天平(德國Sartorius公司);高良薑素對照品、山柰素?4′?甲醚對照品、DPHA、DPHC對照品均為自制，經UV、NMR、MS確定化合物結構，以HPLC法按面積歸一化法計，質量分數>98.0%;乙腈(色譜純);超純水;高良薑藥材為各地收集的市售產品，經廣東藥學院中藥鑑定教研室王鳳雲老師鑑定均為姜科植物高良薑的根莖。
2、方法與結果
2.1 溶液的製備
2.1.1 對照品溶液的製備
分別精密稱取高良薑素、山柰素?4′?甲醚、DPHA、DPHB、DPHC對照品，加甲醇製成每1 mL含1.068、0.414、1.243、0.248、0.989 mg的對照品儲備液。分別精密量取上述對照品儲備液各1 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇稀釋並定容至刻度，搖勻，製成對照品溶液。
2.1.2 供試品溶液的製備
取不同批號的高良薑藥材細粉約0.2 g，精密稱定，加甲醇約40 mL迴流提取2 h，放冷，過濾，濾液加甲醇定容至50 mL。搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，作為供試品溶液。
2.2 色譜條件
廣東藥學院學報，2008，24(5)第5期 陳平,等.高良薑藥材中4種有效成分的含量測定 色譜柱：Diamonsil TMC18色譜柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動相：乙腈(A)?0.2%磷酸水(B)，梯度洗脫[0～30 min，A?B(39∶42);30～35 min，A?B(45∶55)]，檢測波長：220 nm;流速：1.0 mL/min;柱溫：30 ℃，進樣量：20 μL。
2. 3 系統適應性試驗
分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各20 μL注入液相色譜儀，計算理論板數及分離度，結果見表1、圖1、圖2。
2.4 線性關係的考察
分別精密吸取對照品溶液5、10、15、20、25 μL注入液相色譜儀，按“2.2”色譜條件測定，以峰面積積分值為縱座標，對照品進樣量為橫座標繪製標準曲線，結果見表1。表1 系統適應性試驗結果
成分線性方程r線性範圍/μg高良薑素Y=4.0×106 X+5.1×1040.999 80.267 0～1.328 0山柰素?4′?甲醚Y=4.0×106X+2.5×1040.999 90.103 4～0.517 0DPHAY=2.0×106X+2.0×1040.999 90.310 8～1.554 0DPHCY=8.2×105X+4.7×1030.999 40.247 3～1.236 0
2.5 重複性試驗
取高良薑藥材細粉(批號20080315)約0.2 g，精密稱定，共6份，按“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液後，按“2.2”色譜條件下測定各組分的含量，結果高良薑素、山柰素?4′?甲醚、DPHA、DPHC的RSD值(n=6)分別為0.92%、1.60%、0.45%、1.8%，表明方法重現性良好。
2.6 穩定性試驗
取供試品溶液(批號20080315)1份，分別間隔4、12、24、36、48 h進樣，連續測定2 d，計算含量，結果高良薑素、山柰素?4′?甲醚、DPHA、DPHC的RSD值(n=6)分別為0.71%、1.51%、1.7%、1.9%，表明供試品溶液在48 h內測定結果穩定。
2.7 加樣回收率試驗
取高良薑藥材粉末(批號20080315)約0.1 g，共6份，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加入“2.1.1”項下的高良薑素、山柰素?4′?甲醚、DPHA、DPHC對照品儲備液溶液各1 mL，按“2.1.2”項下方法制備溶液，按“2.2”項色譜條件操作並計算，結果見表3。 表3 回收率試驗結果