【摘要】
【目的】建立羅布麻葉揮發性成分頂空氣相色譜—質譜（HSGC?MS）指紋圖譜分析方法,評價不同產地羅布麻葉藥材的質量。【方法】採用HSGC?MS聯用技術對不同產地羅布麻葉的揮發性成分進行分析,測定其指紋圖譜,確定共有指紋峰,並作模糊聚類分析和相似度評價。【結果】羅布麻葉揮發性成分中含有14個特徵性指標成分,初步建立了以此14個共有峰為特徵指紋資訊的HSGC?MS指紋圖譜。【結論】本方法準確可靠,重複性好,可作為羅布麻葉質量評價的依據。
【關鍵詞】 羅布麻葉/化學；揮發性成分/分析；指紋圖譜
羅布麻葉為《中國藥典》收載的常用中藥,系夾竹桃科植物羅布麻Apocynum venetom L.的乾燥葉,具有平肝安神、清熱利水之功效［1］。現代用於治療高血壓、高血脂、冠心病、哮喘、氣管炎等疾病有較好的效果［2］。羅布麻葉揮發性成分為主要活性成分之一,如芳樟醇有鎮靜、降血壓、抗菌等作用［3］,薄荷酮和胡薄荷酮有解熱、鎮痛、抗炎作用［4］,藏紅花醛有較強的抗癌活性［5］,氧化石竹烯有平喘、鎮靜、抗癌作用,1?α?萜品醇有顯著平喘功效［6］,但尚未見有關羅布麻葉揮發油指紋圖譜研究的報道。本研究採用頂空氣相色譜—質譜（HSGC?MS）聯用技術對不同產地羅布麻葉的揮發性成分進行分析，現報道如下。
1儀器與試藥
Agilent 6890/5975B型氣—質聯用分析儀,工作站,Agilent G1888頂空自動進樣器(美國安捷倫儀器公司),NIST05標準質譜檢索庫。
羅布麻葉各產地樣品為實地採集或由當地藥材公司提供,編號為：S1?江西,S2?安徽,S3?吉林,S4?山東,S5?山西,S6?江蘇,S7?新疆,S8?河北,S9?內蒙古,S10?天津,S11?遼寧,S12?陝西。均經研究者鑑定為夾竹桃科植物羅布麻Apocynum venetom L.的'葉。留樣憑證存放於南京中醫藥大學中藥鑑定實驗室。
2方法與結果
2.1分析條件
2.1.1色譜條件色譜柱：HP?5MS(塗布濃度為5%的苯甲基聚矽氧烷彈性石英毛細管柱,30.0 m×250 μm×0.25 μm)；進樣口溫度：180℃；程序升溫：50℃保持20 min,以4℃/min的速率升至200℃,保持5 min；載氣：He氣,流量：1.0 mL/min,分流比15∶1。
2.1.2質譜條件電離方式：電子轟擊離子源(EI)；離子源溫度：230℃,四級杆溫度：150℃,介面溫度：280℃；電子倍增器電壓：1 329.4 V；電子能量:70 eV；掃描範圍：45.0~650.0 aum。
2.2頂空供試品製備
通過對藥材粉碎粒度、體積裝樣量、頂空加熱溫度及頂空加熱時間進行考察,確定羅布麻葉揮發性成分優化的頂空條件：取羅布麻葉粉末(過40目篩)3 g,精密稱定,置頂空瓶中,密封,放入頂空進樣器,120℃加熱平衡30 min,供測試。
2.3方法學考察
2.3.12 h記錄圖取羅布麻葉揮發性成分進樣分析,結果表明：60～120 min無出峰,提示50 min內揮發性成分出峰完全。
2.3.2精密度試驗取羅布麻葉(S2)揮發性成分進行分析,連續進樣5次。結果表明：14個指標成分群保留時間的相對標準偏差均小於0.21%,相對含量的相對標準偏差均小於5%,提示儀器精密度良好。
2.3.3穩定性試驗取羅布麻葉(S2)揮發性成分進行分析,分別在1、3、6、24、48、120 h進樣6次,得14個主要特徵峰保留時間、相對含量。結果表明：14個指標成分群保留時間相對標準偏差均小於0.29%,相對含量的相對標準偏差均小於5%,提示120 h內樣品(溶液)穩定性較好。
2.3.4重複性試驗取同一批次羅布麻葉(S2)5份,提取揮發性成分後分別進樣分析,得14個主要特徵峰的保留時間和相對含量。結果表明：14個指標成分群保留時間的相對標準偏差為0%～1.37%,相對含量的相對標準偏差為1.83%～5.15%,說明重複性較好。
2.4指紋圖譜建立
樣品按選定的頂空條件及分析條件進行分析,測得所有供試品的氣相色譜—質譜（GC?MS）總離子流圖；再對總離子流圖中的各峰經質譜掃描後得質譜圖,所有組分質譜資料經計算機處理和NIST05標準質譜相簿檢索鑑定,並與有關標準譜圖核對,初步確定出羅布麻葉揮發性成分中53種化合物。根據羅布麻葉揮發性成分HSGC?MS總離子流圖所給出的峰數高、峰保留時間和峰面積值等相關引數以及成分鑑定結果,進行分析、比較,制定HSGC?MS指紋圖譜(圖1，見彩圖頁第666頁)。
2.5指紋圖譜分析