調查寧夏小腸結腸炎耶爾森菌人群及動物感染現狀,生物型別的分佈及毒力基因攜帶情況.下面是小編蒐集整理的小腸結腸炎耶爾森菌生物學特性的論文範文，歡迎大家閱讀參考。
摘要：目的理解登封市2013年小腸結腸炎耶爾森菌生物學特性及宿主散佈特徵。辦法用傳統培育辦法別離小腸結腸炎耶爾森菌，並停止生化鑑定、血清分型和毒力基因PCR檢測。後果2013年採集標本共1138份，別離出小腸結腸炎耶爾森菌169株，總檢出率為14.85%;其中豬標本檢出率高達36.55%(114/394);生物型3型佔86.39%(146/169)，均為O∶3血清型;毒力基因ail+、ystA+、yadA+、virF+佔81.06%(137/169)，ail+、ystA+佔5.33%(9/169)，ystB+佔12.43%(21/169)，ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-佔1.18%(2/169)。結論豬是小腸結腸炎耶爾森菌的劣勢宿主;小腸結腸炎耶爾森菌的血清型以O∶3型為主。
關鍵詞：小腸結腸炎耶爾森菌;毒力基因;生物分型;登封市小腸結腸炎
耶爾森菌(Yersiniaenterocolitica)是一種人獸共患性、食源性病原菌，可在冷藏溫度下生長，普遍存在於自然界各種植物宿主[1-2]，包括牲畜、家禽、齧齒植物、匍匐植物和水生植物等，其中豬、犬、牛等宿主與人群感染有重要關係，其可惹起胃腸道症狀、呼吸零碎、心血管零碎和骨骼結締組織等部分組織或全身性疾患[3]。20世紀80年代中期，蘭州[4]和瀋陽市發作小腸結腸炎耶爾森菌盛行，感染病例達500例，惹起高度關注。2013年登封市擴充套件對腹瀉患者、牲畜和家禽等監測範圍，尤其是對屠宰場豬咽拭子、肛內容物及食品等監測範圍。對別離出的小腸結腸炎耶爾森菌停止生物化學鑑定、血清學分型及PCR擴增毒力基因等，理解小腸結腸炎耶爾森菌的生物學特性及宿主散佈特徵，為預防控制小腸結腸炎耶爾森菌感染提供迷信根據。
一、資料與辦法
1.1樣原本源
2013年在登封市共採集各類標本1138份。其中，在腹瀉監測點採集腹瀉患者糞便569份;在各鄉鎮採集牲畜、家禽糞便標本32份;在定點生豬屠宰場，用已消毒的棉拭子(特製加長)採集剛屠宰後生豬咽拭子及肛內容物394份;採集市場待售肉製品143份。
1.2試劑及儀器
小腸結腸炎耶爾森菌選擇性培育基和配套抗生素為美國BD公司產品，0.1mol/L磷酸鹽緩衝溶液(pH7.4，改進PBS)、克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)、動力吲哚尿素培育基(MIU)均購自上海市疾病預防控制中心(CDC)，哥倫比亞養分瓊脂購自英國Oxoid公司。小腸結腸炎耶爾森菌分型血清購自日本生研株式會社(包括O∶1、O∶2、O∶3、O∶5、O∶8和O∶9型)，菌株鑑定用的API20E生化板條及配套試劑均購自法國生物梅里埃公司，PCR擴增相關試劑及引物分解來自生工生物工程(上海)股份無限公司。PCR熱迴圈儀、電泳儀、瓊脂糖凝膠電泳成像儀均為美國Bio⁃Bad公司產品。PCR擴增用Premix、2000bpDNALadder(DL2000)均購自TaKaRa公司。
1.3菌株的別離培育
將採集標本於4℃冷增菌培育，辨別於7、14、21d後轉種於小腸結腸炎耶爾森菌選擇性培育基，25℃培育24～36h，挑取疑似菌落轉種於克氏雙糖斜面25℃培育24h，選擇克氏雙糖+/+、不產氣、H2S-，接種於尿素培育基及半固體培育基，選擇尿素酶+、25℃培育動力+、37℃培育動力-，鏡檢為革蘭陰性桿菌或橢圓或球杆菌細菌，運用API20E腸道菌生化鑑定板條停止菌種鑑定[5-7]。
1.4生物分型及血清分型
生化反響是小腸結腸炎耶爾森菌鑑定的次要根據，同時將檢測後果作為生物分型的根據。詳細參照文獻[3]停止。對鑑定後果為小腸結腸炎耶爾森菌的菌株參照文獻[8]停止血清學分型，設鹽水對照。1.5PCR檢測藉助PCR檢測技術對小腸結腸炎耶爾森菌黏附侵襲點基因(ail)、耐熱性腸毒素基因(ystA)、生物1A型攜帶的'腸毒素基因(ystB)、黏附素(yadA)、yop調理子轉錄活化作用因子(virF)等停止檢測。PCR產物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳別離(170V，30min)，引物序列參照文獻[9]停止。攜帶ail+、ystA+、yadA+、virF+、ail+或ystA+等基因的菌株為致病性菌株，攜帶ystB+、ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-基因的菌株為非致病性菌株。
二、後果
2.1標本檢出狀況
2013年採集人、植物宿主糞便、豬咽拭子、豬肛拭子及食品標本共1138份，小腸結腸炎耶爾森菌總檢出率為14.85%(169/1138)。腹瀉患者、犬、雞糞便的小腸結腸炎耶爾森菌檢出率辨別為0.70%(4/569)、50.00%(2/4)和13.33%(2/15);豬咽拭子及肛內容物小腸結腸炎耶爾森菌的檢出率為36.55%(144/394)。食品樣品的小腸結腸炎耶爾森菌檢出率為11.89%(17/143)。
2.2生物分型及血清學分型後果
169株小腸結腸炎耶爾森菌經API20E生化鑑定板條鑑定，1A生物型佔13.61%(23/169)，3型生物型佔86.39%(146/169);因血清型別無限，10株菌未停止定型(5.92%)，O∶3血清型佔86.39%(146/169)，O∶5血清型佔7.69%(13/169)，見表1.
2.3毒力基因檢測狀況
對169株菌株ail、ystA、ystB、yadA和virF5種毒力基因停止檢測，ail+、ystA+、yadA+、virF+佔81.06%(137/169)，ail+、ystA+佔5.33%(9/169)，ystB+佔12.43%(21/169)，ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-佔1.18%(2/169)。
三、討論
小腸結腸炎耶爾森菌的爆發盛行顯示均與食物相關[4]。小腸結腸炎耶爾森菌的致病性與散佈在染色體和70kb質粒編碼的毒力因子有關，且需兩因子共同作用使其進入上層淋巴組織定殖，發揚致病作用[10]。PCR擴增的5種毒力基因有ail、ystA、ystB、yadA、virF等，依據毒力基因攜帶狀況將小腸結腸炎耶爾森菌分為致病性菌株及非致病性菌株。2013年登封市別離小腸結腸炎耶爾森菌陽性菌株169株，其致病性菌株(ail+、ystA+、yadA+、virF+、ystA+)佔86.39%(146/169)，非致病性菌株(ystB+、ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-)佔13.61%(23/169)，緣由為在本年度的監測中，豬體內的小腸結腸炎耶爾森菌檢出率較高，且均為致病性菌株。闡明豬是該菌的劣勢宿主，且其體內攜帶的小腸結腸炎耶爾森菌大區域性為致病性菌株，該後果與以往研討後果分歧[7]。小腸結腸炎耶爾森菌血清型較多，我國報道的血清型達58個[11]，以O∶3、O∶5、O∶8和O∶9型菌株為主。近年來，O∶3型菌株的盛行呈上升趨向[12]。本次監測的宿主以O∶3血清型為主，佔86.39%(146/169)。李洪民等[5]調查顯示，O∶3、O∶5血上清型均佔13.48%(12株)，O∶8佔15.73%(14株)。2011年登封市小腸結腸炎耶爾森菌以O∶3血清型為主，佔81.87%(289株)[6]，與本調查後果分歧。小腸結腸炎耶爾森菌在自然界散佈普遍，包括一切的牲畜、家禽和齧齒類植物等。故登封市在以往的監測根底上，應持續展開牲畜、家禽、患者及重點宿主的帶菌情況調查。本次調查牲畜豬體內的小腸結腸炎耶爾森菌檢出率高達36.55%，與相關報道分歧[9，13]。該後果對當前的小腸結腸炎耶爾森菌疫情防控有重要的迷信指點意義，應增強小腸結腸炎耶爾森菌盛行知識的宣傳，尤其增強對豬的養殖者指點。志謝中國CDC傳染病預防控制所景懷琦研討員及其團隊在課題完成程序中給予協助。