【摘要】 目的探討SDS-PAGE聚丙烯醯胺凝膠電泳技術對穿心蓮種子進行鑑別的可行性，為穿心蓮種子鑑別及育種研究提供科學依據。方法 採用聚丙烯醯胺凝膠電泳技術，對廣東省幾種不同來源和不同採收期的穿心蓮種子進行可溶性蛋白質電泳研究。結果 不同產地的穿心蓮種子蛋白質電泳圖譜之間在譜型和譜帶的強弱、蛋白質相對含量上均有一定的差異，不同採收期穿心蓮種子蛋白質電泳在蛋白質譜帶的強弱上有一定差異。結論 聚丙烯醯胺凝膠電泳技術可用於穿心蓮種子鑑定。
【關鍵詞】 穿心蓮;聚丙烯醯胺凝膠電泳;種子;鑑定
Abstract:ObjectiveTo explore the feasibility of seed identification with SDS-PAGE,and provide scientific basis for breeding of Andrographis ods SDS-PAGE polyacrylamide gel electrophoresis technology was adopted for analyzing soluble proteins of several different sources and different collection time in lts Significant differences were observed in spectral pattern,contents of proteins and intensity of bands of Andrographis paniculata from different origins,and in spectral degree between various collection lusion Polyacrylamide gel electrophoresis technology can be used for seed identification of Andrographis paniculata seeds.
Key words:Andrographis paniculata; polyacrylamide gel electrophoresis; seed; identification
穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees為爵床科植物，具有清熱解毒、涼血消腫等功能,臨床上常用於急性菌痢、胃腸炎、感冒、流腦、氣管炎、高血壓等疾病的治療[1]。研究表明，不同產地、不同採收期的穿心蓮性狀、成分差異較大，種子混雜現象也較嚴重[2]。中藥材種子所含蛋白質的種類和數量攜帶了其長期演化的遺傳特徵，具有很高的穩定性和專屬性，其真偽和品種鑑別是中藥集約化生產的重要環節和前提。1991年國際種子檢驗協會將蛋白質電泳方法正式定為標準的品種鑑定方法。目前，蛋白質電泳技術迅速發展和日臻完善，但大多應用於玉米、棉花等植物中[3-4]，應用於藥用植物的研究尚為數不多[5-7]。筆者收集了幾種不同產地和不同採收期的穿心蓮種子，利用蛋白質電泳技術對其進行檢測，旨在為穿心蓮種質資源的保護、評價，種子的鑑定及育種提供參考依據。
1材料與方法
1.1材料
採集4個不同地區和同一地區3種不同採收期的成熟穿心蓮果實，室溫下陰乾，待果皮自然裂開彈出種子。收集於種子瓶中置室溫陰涼處儲存，各種子來源見表1。
1.2儀器與試劑
DYY-11型電泳儀(北京市六一儀器廠)，DYCZ-24DN雙垂直平電泳槽(北京市六一儀器廠)，TDL80-2B臺式離心機、HK3300H超聲波清洗器(上海科導超聲儀器有限公司)，PHS-30酸度計(上海精密科學儀器有限公司)，HC-TP12-2型架盤藥物天平(北京醫用天平廠)。表1穿心蓮種子來源2 mol·L-1 Tris-HCl(pH=8.8)，1 mol·L-1Tris-HCl(pH=6.8)，10%(質量濃度)SDS，50%(體積分數)甘油，1%(質量濃度)溴酚藍，考馬斯亮藍R-250染液(取0.04 g考馬斯亮藍R-250，加入甲醇18 mL、蒸餾水18 mL和冰醋酸4 mL，即得)，考馬斯亮藍脫色液(10 mL甲醇、10 mL冰醋酸和80 mL蒸餾水混勻)，30%(質量濃度,下同)丙烯醯胺，0.8%N，N’-甲叉雙丙烯醯胺，10%SDS，10%過硫酸銨，1%溴酚藍。
1.3方法