細胞塊技術基本原理是將樣品離心，使其中的細胞和微小組織塊濃縮後固定，石蠟包埋後切片染色觀察，下面是小編蒐集整理的一篇探究製作漿膜腔積液細胞塊方法的論文範文，供大家閱讀檢視。
漿膜腔積液是臨床中最為常見的一種體徵，炎症和腫瘤是引起積液的主要原因。積液性質的診斷以往主要通過塗片進行，但是由於常規塗片法存在塗片厚、細胞重疊、結構不清、細胞量少、陽性檢出率低等缺點[1-2],使得診斷的敏感性僅為50%~78%[3].細胞塊技術基本原理是將樣品離心，使其中的細胞和微小組織塊濃縮後固定，石蠟包埋後切片染色觀察。細胞塊通過石蠟包埋後類似組織塊，可以連續切片及永久性儲存標本，彌補了傳統塗片的不足，還可以進行進一步相關檢測。關於細胞塊技術的應用在文獻中可見零星報道，製備方式也各異，本研究通過對比四種漿膜腔積液細胞塊製作方法，試圖找到一種更適合基層醫院推廣開展的細胞塊製作方法。
1材料與方法
1.1材料收集桂林醫學院附屬醫院2010-2012年間的漿膜腔積液標本80例，積液量50~200ml,其中胸腔積液53例，腹腔積液27例，樣本包含略渾濁的積液35例為第一組;血性積液或渾濁的積液45例為第二組。
1.2方法把每例樣本分作4份，按下列步驟進行操作：所有樣本在一次性10ml塑料試管中離心2000r/min,離心5min,之後將沉澱部分做以下處理①將試管內上清液去除，加入適量95%乙醇之後再次離心2000r/min、5min,去除上清液之後，用手術剪在距試管底部沉澱物上方0.1~0.2cm處剪去上段試管，再將試管底部剪出一個小口子，便於脫水劑穿透。將裝有沉澱物的試管底端用拭鏡紙包好後放入包埋盒中(試管包埋法).②將試管內上清液去除，儘可能用鑷子將在底部的'沉澱物取出，用拭鏡紙包好後放入包埋盒中(普通離心沉澱法).③將試管內上清液去除，用濾紙儘可能吸去多餘水分，在其中加入人血清液混勻後再次離心，取沉澱物用拭鏡紙包好後放入包埋盒中。④將試管內上清液去除，用濾紙儘可能吸去多餘水分，在其中加入適量融化的瓊脂混勻，待冷凝固後，取出沉澱物放入包埋盒中。以上4種細胞塊製作完成後，均放入95%乙醇中固定1h,經過常規脫水透明，包埋，HE製片。
1.3結果判定
1.3.1成功率判定細胞沉渣能夠製作成細胞塊，沉渣大部分能夠聚攏在2cm×2cm的範圍內，並能夠製成切片就認定為製作細胞塊成功，可以允許有一些沉渣散落。
1.3.2細胞塊完整性判斷細胞蠟塊製成後，細胞保留完整，結合性較好，幾乎沒有或及有少量的散落細胞，能夠完整製片，即為具有完整性。
1.4統計學分析所得資料，應用SPSS15.0統計軟體進行處理，各組間比較應用χ2檢驗。
2結果
2.1細胞塊製作成功率對比
2.1.1第一組35例略渾濁的漿膜腔積液經統計學處理，35例略渾濁的漿膜腔積液細胞塊製作的4種方法成功率差異有統計學意義(χ2=27.47,P<0.01).其中試管包埋法與普通離心沉澱法、血清凝聚法，普通離心沉澱法與瓊脂凝聚法、普通離心沉澱法與血清凝聚法成功率的差異均有統計學意義(χ2=21.25、4.79、16.73、6.94,P<0.01或<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法，血清凝聚法與瓊脂凝聚法制作成功率差異無統計學意義(χ2=0.40、2.52,P>0.05).(表1,圖1,圖2)
2.1.2第二組45例血性或渾濁的漿膜腔積液經統計學處理，45例血性或渾濁的漿膜腔積液細胞塊製作成功率的差異均無統計學意義，其中普通離心沉澱法與試管包埋法、血清凝聚法、瓊脂凝聚法成功率的差異均無統計學意義(χ2均為3.10,P>0.05).(表2,圖3,圖4)
2.2細胞塊製做完整性對比四種方法制作成功的所有細胞塊包括：試管包埋法75例，普通離心沉澱法53例，血清凝聚法67例，瓊脂凝聚法73例。
經統計學處理，細胞塊製作的4種方法完整率差異有統計學意義(χ2=64.17,P<0.01).其中試管包埋法與普通離心沉澱法、血清凝聚法;普通離心沉澱法與血清凝聚法、瓊脂凝聚法;血清凝聚法與瓊脂凝聚製作方法完整率的差異均有統計學意義(χ2值=39.63、3.97、20.32、41.23、4.91,P<0.01或P<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法制作完整率差異無統計學意義(χ2=0.07,P>0.05)(表3).
3討論
傳統塗片中細胞量少、塗片重疊、需要觀察範圍很大，容易導致漏診，而且對於細胞形態不典型的間皮細胞、轉移癌細胞，尤其是對散在的癌細胞的鑑別時常很困難。文獻報道有高達12%的病例會遇到間皮細胞與癌細胞難以鑑別的狀況[4].這種診斷的不明確甚至可以延誤治療。細胞塊技術通過離心包埋，集中獲得了最大限度濃縮的樣本，彌補了傳統塗片的不足之處，細胞塊石蠟包埋切片收集到的有核細胞多、細胞結構清晰，與常規塗片法相結合，可以大大提高細胞學的陽性檢出率，對細胞量較少或診斷困難的標本意義更大。而且細胞塊通過石蠟包埋後，可以進行特殊染色、免疫組化甚至分子病理學檢查。
本研究收集80例漿膜腔積液樣本，包括略渾濁的積液35例，血性或渾濁積液45例，對比試管包埋法、普通離心沉澱法、血清凝聚法和瓊脂凝聚法四種漿膜腔積液細胞塊製作方法在常見的積液中製備細胞塊的成功率以及細胞塊製備的完整性。研究結果顯示：在第一組略渾濁的積液中，試管包埋法與普通離心沉澱法、血清凝聚法，普通離心沉澱法與瓊脂凝聚法，普通離心沉澱法與血清凝聚法成功率的差異均有統計學意義(χ2=21.25、4.79、16.73、6.94,P均<0.01或P<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法，血清凝聚法與瓊脂凝聚法制作成功率差異無統計學意義(χ2=0.40、2.52,P均>0.05).說明在略渾濁的積液中，成功率較高的是試管包埋法、瓊脂凝聚法以及血清凝聚法，而普通離心沉澱法雖然方法最為簡單，但成功率與前三者比較具有差異性。此外，對於略渾濁樣本，我們發現僅僅通過一次離心獲取細胞塊的成功率很低，有時需要多管離心，將沉澱物彙總後二次離心，這樣所需的細胞數量便會增多，有利於細胞塊的製備。但是，在實際工作中我們發現略渾濁積液往往屬於漏出液，由腫瘤引起的可能性非常低，因此儘管四種方法在製備澄清積液細胞塊的成功率不同，但是實際在診斷活動中需要製備成細胞塊的情況比較少，使用率比較低。
在血性或渾濁的積液中，四種方法制成細胞塊的成功率都在93.3%以上，比較沒有差異性(P>0.05).說明用任一種方法都能較為成功的製成細胞塊。由於血性或渾濁積液多為滲出液，由腫瘤或其他特殊感染等原因導致的可能性增加，因此能夠採用四種方法成功製備出細胞塊有其實際意義。
此外，本研究還對四種方法制作成細胞塊的完整性進行了對比，比較哪一種細胞塊蠟塊製作形態更為完整。資料顯示，試管包埋法與普通離心沉澱法、血清凝聚法;普通離心沉澱法與血清凝聚法、瓊脂凝聚法;血清凝聚法與瓊脂凝聚法制作方法完整率的差異均有統計學意義(χ2值=39.63、3.97、20.32、41.23、4.91,P均<0.01或P<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法制作完整率差異無統計學意義(χ2=0.07,P>0.05).說明，在細胞塊製成完整性方面，試管包埋法與瓊脂凝聚法都能夠較為完整地儲存細胞成分，且製成的細胞塊、切片形態較為完整，其效果優於血清凝聚法、普通離心沉澱法。而普通離心沉澱法對於完整性的儲存效果最差。細胞塊的完整性直接決定製作成的切片的完整性，如果結構較為鬆散，不易於連續切片，切片容易掉片，尤其在需要高溫水煮的免疫組化指標的製備過程中，掉片情況會更為顯著，易造成有效成分丟失和假陰性結果。
四種方法中，以普通離心沉澱法最為簡單，試管包埋法和血清凝聚法次之，瓊脂凝聚法操作步驟最為複雜。根據實驗結果，我們建議，在細胞成分不太多的略渾濁的漿膜腔積液樣本中，使用試管包埋法、瓊脂凝聚法，對於沉澱較少的樣本可以採取多管離心從而加大樣本量。而對於細胞成分豐富的血性或渾濁的漿膜腔積液樣本，四種方法都可採用，但試管包埋法由於其操作簡單、細胞塊形態完整性高，是較為理想的選擇，值得在基層醫院推廣。
參考文獻：
[1]郭智俊，彭桂香，潘乃樑。胸腹水沉澱物瓊脂石蠟雙包埋切片法與常規塗片法的對比[J].臨床與實驗病理學雜誌，2002,18(4):437-437.
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[4]ImlaySP,ralfluidcytology:immunocytochemistryusagepatternsandsignificanceofnondefinitivediagnoses[J]ncytopathol,2000,22(5):281-285.