作者單位：730046 甘肅蘭州，蘭州生物製品研究所血液製劑室
【摘要】 目的 主要探討人免疫球蛋白類製品在不同條件下對HCV抗體檢測結果的影響。方法 使用不同的4個生產廠家的丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒（ELISA），用兩種不同的稀釋液將免疫球蛋白的蛋白濃度稀釋至1%。比較免疫球蛋白原液在酸性（pH4）條件下和中性條件下對檢測結果的影響；人免疫球蛋白和靜注人免疫球蛋白(pH4)加入穩定劑後對檢測結果的影響；靜注人免疫球蛋白在酸性條件（pH4）下和中性條件下對檢測結果影響。結果 兩種不同的稀釋液對檢測結果進行比較，結果完全1致；在酸性條件下，兩種不同的稀釋液，有1廠家檢測結果OD值在灰區內。結論 酸性（pH4）條件下的製品不同廠家的丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒檢測結果有明顯差異，使用不同的稀釋液和製品中有無穩定劑對檢測結果沒有影響。
【關鍵詞】 人免疫球蛋白 HCV抗體 ELISA
用酶聯免疫吸附（ELISA）方法對原料血漿實施HBsAg、HCV抗體和HIV抗體的篩查有利於保障原料血漿的安全［1］。目前對原料血漿的篩查採用單採血漿站使用1種診斷試劑進行初篩，血液製品生產企業使用不同廠家的另1種診斷試劑進行復查，即便經過了兩次嚴格的逐袋篩查，仍有因隱匿性丙肝感染而導致漏檢的。目前公認，採用WHO推薦的低溫乙醇法並經病毒滅活處理的人血白蛋白和免疫球蛋白是安全的血液製品［2］。即便如此，為進1步提高血液製品的安全性，今年國家食品藥品監督管理局已要求血液製品生產企業積極摸索和建立人免疫球蛋白類製品進行HCV抗體和HIV抗體的檢測方法及標準，鑑於此因，筆者選擇10個批次的經低pH放孵病毒滅活的人免疫球蛋白，在同1蛋白濃度條件下（蛋白濃度為1%），對不同pH值條件和按製品工藝要求加入不同穩定劑，以及兩種不同蛋白稀釋液對HCV抗體檢測結果的影響進行了比較，現報告如下。
1 材料與方法
1.1 樣品來源 樣品取自本所血液製劑室低pH放孵病毒滅活後的10批人免疫球蛋白原液（編號1～10）。
1.2 試劑與儀器
1.2.1 試劑 丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒（ELISA）分別由廠家A，批號：C20061103、C20070101、C20070203；廠家B，批號：20061113、20070107、20070203。廠家C，批號：20060801、20060802；廠家D，批號：2006085806、2006095807、2006115808。
1.2.2 儀器 酶標儀，型號：Multiskan Mk3（芬蘭雷勃公司生產），洗板機，型號：Wellwash 4 Mk2（芬蘭雷勃公司生產），檢測按儀器和試劑盒要求操作。
1.3 稀釋方法 （1）樣品A 低pH放孵病毒滅活後的免疫球蛋白原液，不含任何穩定劑，pH3.8～4.1；樣品B：低pH放孵病毒滅活後的免疫球蛋白原液，按生產工藝要求配製為肌肉注射人免疫球蛋白，含氯化鈉、甘氨酸、麥芽糖、硫柳汞，作為穩定劑，pH6.7～7.0；樣品C：低pH放孵病毒滅活後的.免疫球蛋白原液，按生產工藝要求配製為靜注人免疫球蛋白，含麥芽糖作為穩定劑，pH3.8～4.1。分別使用生理鹽水和相應的診斷試劑盒的稀釋液將以上3類樣品的蛋白濃度稀釋為1%，pH值不做調整，為原製品pH值，所得樣品編號為ⅠA1、ⅠA2； ⅡB1、ⅡB2； ⅠC1、ⅠC2，1為生理鹽水稀釋，2為診斷試劑盒稀釋液稀釋，Ⅰ為酸性條件下樣品；Ⅱ為中性條件下樣品。（2）將樣品A的pH值調整為6.7～7.0；將樣品B的pH值調整為3.8～4.1；將樣品C的pH值調整為6.7～7.0，按方法（1）稀釋以上樣品，所得樣品編號為ⅡA1、ⅡA2；ⅠB1、ⅠB2；ⅡC1、ⅡC2。
所得樣品按各診斷試劑廠家說明書進行檢測，灰區為CO值±15%的範圍。
2 結果
應用不同稀釋方法所獲得的樣品，用不同廠家的試劑盒進行檢測，每個樣品檢測兩孔，檢測結果見表1。表1 10批不同條件的樣品4個不同廠家試劑HCV抗體檢測結果
3 討論
以上結果表明，10批人免疫球蛋白類製品，對免疫球蛋白原液、人免疫球蛋白和靜注人免疫球蛋白製品進行檢測使用生理鹽水稀釋［3］和使用試劑盒稀釋液稀釋，然後按檢測試劑說明書進行檢測，其結果是完全1致的。經對免疫球蛋白原液（不含任何穩定劑），人免疫球蛋白（含穩定劑），靜注人免疫球蛋白（含穩定劑），檢測結果表明，不同的製品所含穩定劑與否對檢測結果也沒有影響；在低pH條件下，免疫球蛋白原液（低pH放孵後），靜注人免疫球蛋白(pH4) 經兩種不同稀釋液稀釋，發現廠家B的檢測試劑盒10個批次的檢品OD值均在灰區內，另外3個試劑廠家的檢測結果均為陰性。文獻報道用ELISA法檢測HCV抗體灰區血樣經重複檢測有12.6%（11/87）的假陰性率［4］，並且對落在灰區範圍內的隨機抽樣樣本進行的PCR檢測，HCVRNA的陽性率為18%（3/11）。表明灰區內樣本確實存在著病毒複製［5］，如果不設定灰區，就有可能造成漏檢，因此，為了提高製品安全性，灰區的設定有著重要的意義［6］。但是，不同HIV抗體檢測對丙型肝炎的檢測結果有明顯差異［7，8］。ELISA試劑生產廠家包被的抗原片段和生產工藝存在差異是影響試劑盒質量的主要因素［9，10］，但是從另外3家診斷試劑盒的檢測結果和B廠家對同1批號製品在低pH條件下的結果來看，樣品的低pH值是影響廠家試劑檢測結果並導致樣本落在灰區的原因。由低溫乙醇法分離工藝並經低pH放孵病毒滅活後製備的人免疫球蛋白類製品是安全的，但是在成品檢測過程中，由於靜注人免疫球蛋白（pH4）製品的酸性特點，有可能使個別廠家生產的診斷試劑盒檢測的樣品的OD值落在灰區內，甚至造成誤判的情況。為提高血液製品的安全性，國家食品藥品管理局要求對血液製品生產用原料血漿實施“檢疫期”，經對供漿者血漿樣本再次進行病毒篩查並檢驗合格，方可投入生產。除此之外，還應積極摸索和建立免疫球蛋白類製品檢測HIV抗體、HCV抗體的方法及標準，隨著此項工作的不斷深入，筆者認為，對影響HCV抗體、HIV抗體檢測結果各種因素，會逐步找到解決的方法。
【參考文獻】
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