【關鍵詞】 白藜蘆醇；全細胞膜片鉗；鈣電流
Effects of resveratrol on Ltype calcium current in isolated ventricular myocytes of guinea pig
【Abstract】 AIM: To investigate the effects of resveratrol on the Ltype calcium current (ICaL) in isolated ventricular myocytes of guinea pig. METHODS: Single ventricular cell was obtained from healthy guinea pig heart using enzymatic dissociation methods. The wholecell patch clamp was used to record the ICaL following the administration of resveratrol at 1, 50, 100 μmol/L. RESULTS: ① Resveratrol reduced the ICaL in a concentrationdependent manner, but it had no effect on IV shape of ICaL. ② Resveratrol markedly shifted the steadystate activation curve of ICaL to the right, and V1/2 value increased from (-18.97±4.08) mV in control to (-15.97±4.13) mV in the presence of resveratrol （n=7, P=0.02）, the κ value from (3.64±0.56) to (3.82±0.60) (n=7，P=0.67). ③ Inactivation curve of ICaL was not affected significantly. ④ The time constant of reactivation of ICaL was reduced from (98.50±9.00) ms to (54.53±4.27) ms (n=6，P=0.000) by resveratrol. CONCLUSION: Resveratrol inhibited the Ltype calcium channel, mainly acting on the activity and recovery processes.
【Keywords】 resveratrol；wholecell patch clamp；calcium current
【摘要】 目的：研究白藜蘆醇對正常豚鼠心室肌細胞L型鈣電流（ICaL）的影響. 方法：採用全細胞膜片鉗技術,記錄不同濃度白藜蘆醇作用前後對ICaL的影響. 結果：①白藜蘆醇呈濃度依賴性阻斷ICaL,但對啟用電位、峰電位、反轉電位均沒有影響；②白藜蘆醇使ICaL穩態啟用曲線右移，V1/2由對照的`（-18.97±4.08） mV變為（-15.97±4.13） mV （n=7，P=0.02），κ由（3.64±0.56）變為（3.82±0.60）（n=7，P=0.67）；③對失活曲線無影響，不改變ICaL失活特性；④白藜蘆醇使ICaL失活後再恢復時間常數τ縮短，從（98.50±9.00） ms變為（54.53±4.27） ms（n=6，P=0.000）. 結論：白藜蘆醇對ICaL有阻斷作用,主要作用於鈣通道啟用和恢復過程.
【關鍵詞】 白藜蘆醇；全細胞膜片鉗；鈣電流
0引言
白藜蘆醇化學名為3,5,4′三羥基反二苯代乙烯(3,5,4′ trihydroxyrans stilbene)，是一種主要存在於葡萄皮、花生中的多酚類植物抗毒素. 現認為它是適量飲用葡萄酒有利於心血管健康的主要作用因子［1］. 大量研究［2-3］發現白藜蘆醇對心肌缺血－再灌注損傷有保護作用；對血管有廣泛的舒張效應［4］;能抗動脈粥樣硬化，防治冠心病［5］. 但其對心肌細胞離子通道的作用少見報道，我們採用膜片鉗技術研究白藜蘆醇對心室肌細胞ICaL的影響.
1材料和方法
1.1材料健康成年豚鼠31只（武漢大學醫學院動物中心），體質量250~350 g，雌雄不拘； I型膠原酶，蛋白酶E,HEPES（Gibco公司）； CSOH, CSCl, Na2ATP（Sigma公司）；白藜蘆醇（西安賽得高科生物股份有限公司）；其餘均為國產分析純. 無鈣臺氏液 (mmol/L)：NaCl 135，KCl 5.4，MgCl2 1，NaH2PO4 0.33，Glucose 20，HEPES 10，pH 7.38 (NaOH調節);KB液(mmol/L)： glumatic acid 50，KOH 85，KCl 30，MgSO4 3，Taurine 20，Glucose 10，HEPES 10，EGTA 0.5，pH 7.2(KOH調節)；電極外液組成(mmol/L)：NaCl 37，Choline Chloride 100，CaCl2 1.8，MgCl2 0.5， HEPES 10，Glucose 10，CSCl 4.6，pH 7.3(CSOH調節)；電極內液組成(mmol/L): CSCl 120， CaCl2 1.0， MgCl2 5， Na2ATP 5，EGTA 11， HEPES 10，Glucose 11，pH 7.4(CSOH調