探研富血小板血漿在口腔組織再生中應用的影響因素

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富血小板血漿(platelet—rich plasma,PRP)是從20世紀60年代用於止血治療開始應用於臨床,1998年Marx首次把PRP與自體髂骨結合應用於下頜骨缺損重建治療中。目前,富血小板血漿定義為利用離心技術使得少量血漿中自體血小板濃縮,並通過凝血酶和CaC1,的啟用使得血小板中的儀鏈釋放其含有的生長因子和黏結蛋白,其同義詞包括血小板凝膠、富生長因子血漿、富血小板纖維等。本文對PRP在口腔組織再生中應用的影響因素做一綜述。

探研富血小板血漿在口腔組織再生中應用的影響因素

1 PRP

1.1 PRP中的生長因子和黏結蛋白儲存於血小板a鏈中的生長因子包括血小板衍生生長因子 (platelet—derived growth factor PDGF)、轉化生長因子B(transforming growth factorbeta,TGF.B)、血小板衍生血管生成因子(platelet—derived vascular growth factor,PAGF)、血小板衍生上皮生長因子(platelet—derived epidermal growthfactor, PDEGF)、l(insulingrowth factor一1,IGF一1)、血管內皮生長因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)等。體外實驗也證實PRP中還含有3種黏結蛋白, 即纖維蛋白原、纖維連線蛋白、玻璃粘連蛋白,這三種分子可作為骨或結締組織的基質。也可作為細胞間的連線分子並以此起著骨誘導的作用。

1.2 PRP的製取方法

隨著裝置和技術的改進,目前各種PRP製取系統都是採用相類似的機制。其流程可簡述為:

①一般從病人前臂靜脈中採集少量全血(用於牙周組織再生治療的全血量為8~10 mL.用於頜骨重建治療的全血量為8~500 mL)。

② 低轉數離心分離:分離出含血小板與紅血球的上清液及去血小板血漿(platelet poor plasma,PPP),棄除去血小板血漿。

③ 高轉數離心分離:紅血球與比重大的PRP分離,去紅血球。

④ 啟用並形成凝膠狀:新增自體或異體凝血酶和CaC12.

1.3 組織再生中PRP作用機制

富血小板血漿作用的發揮在於其所含的大量生長因子和蛋白在受區的持續性釋放。這是岡為這些來自 鏈的多肽分子能夠調控細胞的遷移、附著、增殖、分化.並通過與特定的細胞表面受體結合進而促進胞外基質的堆積,並以此能夠模擬傷口的生理性癒合過程以及組織的修復過程嗍。基於這些理論,PRP能夠促進移植物的內環境穩定性和黏結性,改善骨組織和軟組織的癒合進而縮短術後癒合時間,此外還可以抵消移植物的吸收。

2 影響PRP在口腔組織再生中應用的因素

儘管理論上認為PRP有利於組織再生.但從現有的相關文章報道可以發現,有關PRP是否有利於口腔組織再生存在很大爭議。在動物實驗中,Jakse等在羊上頜竇提升模型中發現實驗組(T)與對照組(C)的組織切片中新骨形成比例不存在顯著差異(T:自體髂骨+PPR;C:自體髂骨);而Ohya等 在兔上頜竇提升模型中證實PRP促進骨形成; 國內學者何家才等在犬下頜骨種植周圍缺損模型中也發現.實驗組(TCP+PRP)的種植體骨結合率和新骨形成質量明顯優於對照組(TCP+生理鹽水)。在臨床試驗中,DOri等發現實驗組(T)與對照組(C)問在臨床附著水平上無顯著差異(T:B—TCP+PRP;C:13一TCP):Piemontese等證實PRP有助於臨床附著水平的增加 通過對文獻的回顧,我們發現影響PRP促口腔組織再生實驗結果差異的因素可以歸納為兩大類:第一類為與PRP相關的因素;第二類為與實驗設計相關的'因素。

2.1 與PRP相關的影響其作用的因素

2.1.1 PRP巾血小板濃度

Marx最早測算出PRP中血小板濃度平均較術前全血中增加了3.38倍。Weibrich等在比較PRP中血小板不同的濃度對成骨影響的實驗巾發現,濃縮度在2~6倍時實驗組與對照組在熒游標記的骨量上存在顯著差異,但濃縮度在6~11倍時卻顯示有抑制成骨細胞活性的作用。Weibrich由此也提出當PRP中血小板計數在1×10 / I 時PRP呈現出最好的生物學作用。也有學者提出1x10e/t~L只是PRP促進組織癒合的最低適合度。目前,對於組織再生有良好臨床作用的最佳血小板濃縮度仍不是很清楚.不過已經明確的是:PRP中血小板濃度較低其促組織再生作用將欠佳,如果濃度過高其促組織再生的作用將受抑制 。JlL~b,有學者認為基於最初全血中血小板數不同,PRP中血小板濃度也將隨著變化。但是Weibrich通過實驗發現,血小板數或生長因子水平在全血和PRP之間不存在相關性 。

2.1.2 PRP促組織再生作用的持續時間

由於血小板的半衰期僅為8~12 d,有學者提出PRP在早期有促進骨形成的作用,但隨時間推移這種作用將會減弱或者消失[17.181:有實驗結果支援此觀點:@Thor等 1有關上頜竇提升術骨移植的成骨性實驗發現,術後3個月PRP組與對照組在新骨形成量上存在明 差異.但在術後6個月兩組問就已無顯著差異;⑦Harnack等[羽有關PRP在牙周手術中應用的隨機對照實驗發現.傷口癒合指數在術後3 d時比較高,但從術後2周起開始下降。

2.1.3 製取PRP 的不同方法

早在2001年Zimmermann等通過實驗發現,PRP中血小板濃度隨不同製取方法而存在明顯差異。Weibrich等f6l認為目前PRP製取方法大致分為梯度密度細胞分離法和‘uffv coat’(白血球層)法,並指出與 uffv coat’(白血球層)法相比梯度密度細胞分離法產生的血小板數多,生長因子水平高。Weibrich等 比較了PCCS (濃縮血小板採集系統,platelet concentrationc0liection system)與Curasan(eurasan PRP kit)兩種不同的PRP製取系統,並發現PCCS系統產生的血小板數更多,TGF—B與IGF I的濃度更高。

2.1.4 PRP的啟用物—— 凝血酶

目前,用於PRP啟用的凝血酶主要為兩種來源:一種為自體獲取的人凝血酶:另一種為異種來源的凝血酶,多為牛凝血酶。Su等 分別用人凝血酶和牛凝血酶來製備PRP膠.發現使用人凝血酶製成的PRP其PDGF和TGF濃度高於用牛凝血酶製成的。

2.1.5 PRP生長凶子的雙重性作用

PDGF和TGF.B都具有刺激或抑制成骨細胞的作用。此外由於PRP內含多種多肽類因子,每個因子對同一組織都有著不同的作用或應答,並相互作用,進而形成多種訊號分子級聯表達途徑,最終導致基因的表達和蛋白形成。在一動物模型中,雖然TGF.p在PDGF的啟用下被釋放,但在組織學中並沒有發現纖維組織的形成。