慢性阻塞性肺疾病患者誘導痰IL8、TNFα水平和炎症細胞的分佈

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慢性阻塞性肺疾病患者誘導痰IL8、TNFα水平和炎症細胞的分佈
【摘要】 目的 比較穩定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)老年患者、老年健康吸菸者和老年健康非吸菸者痰液中IL8、TNFα水平和炎症細胞組成的差異,進而探討IL8、TNFα、中性粒細胞與吸菸的相關性以及COPD氣道炎症的性質。 方法 98例老年研究物件分為3組:COPD組38例、健康吸菸組(HS)30例、健康不吸菸組(HNS)30例,誘導痰方法收集痰液,細胞分類及計數,並用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定痰上清液中IL8、TNFα濃度。結果 COPD組痰液中IL8,、TNFα、中性粒細胞百分比明顯高於健康吸菸組及健康不吸菸組;COPD組痰液中IL8、TNFα水平與中性粒細胞百分比呈顯著正相關性(r=0761,r=0495);健康吸菸組痰中IL?8水平與中性粒細胞百分比亦呈顯著正相關性(r=0544)。結論 IL8和TNFα和中性粒細胞共同參與了吸菸者COPD氣道炎症反應。
【關鍵詞】 慢性阻塞性肺疾病;氣道炎症;IL?8;TNF?α;中性粒細胞
  約80%~90%的慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者是吸菸者,但是僅有20%的吸菸者發展為COPD〔1〕,提示對COPD易感性不同的人群,其氣道對同樣的香菸刺激的反應性不同。目前認為,吸菸引起的氣道和肺組織異常的炎症反應是COPD發病學的中心環節,多種炎症細胞、炎症介質和細胞因子參與COPD複雜的炎症網路。以往的研究認為在COPD急性加重期氣道中性粒細胞明顯增加〔2〕,而在穩定期COPD患者和吸菸肺功能正常者之間氣道中性粒細胞是否存在差異爭議頗大〔3~5〕。IL?8和TNF?α有較強的中性粒細胞趨化作用,本文比較了穩定期COPD老年患者、老年健康吸菸者和老年健康非吸菸者痰液中IL?8、TNF?α水平炎症細胞的差異,進而探討COPD氣道炎症的`性質。
  1 材料與方法
  1?1 研究物件
  本研究物件均為男性,來自2004~2005年門診病例及健康查體人員,經詢問病史、體檢、X線檢查、肺通氣功能檢查,分為以下3組:
  1?1?1 COPD組
  符合中華醫學會呼吸病學分會COPD診斷標準〔6〕並處於穩定期的患者38例,年齡60~78歲,平均(63?6±6?2)歲,均有吸菸史,其中戒菸者4例,戒菸年限15~23年,吸菸年限18~46年,根據肺功能測定結果,對COPD的嚴重程度進行分級〔6〕。本組病人支氣管舒張試驗均為陰性,排除呼吸道變態反應病史及肺癌、心功能不全等疾患。
  1?1?2 健康吸菸組(HS)
  30例,年齡61~73歲,平均(64?1±5?9)歲。肺功能檢測FEV1?0佔預計值(pred)百分比均>80% ,FEV1?0/FVC均>70%,支氣管舒張試驗均為陰性。排除呼吸道變態反應病史及肺癌、心功能不全等疾患。
  1?1?3 健康不吸菸組(HNS):30例,年齡60~74歲,平均(63?5±7?1)歲。肺功能檢測FEV1?0佔預計值百分比均>85%,FEV1?0/FVC均>70%。
  1?2 實驗步驟及方法
  1?2?1 肺功能檢查

  所有研究物件在入選前進行肺功能測定,記錄用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼氣量(FEV1)、第1秒用力呼氣量佔預計值百分比(FEV1/pred%)、第一秒用力呼氣量佔用力肺活量的百分比(FEV1/FVC%)。
  1?2?2 痰標本的收集及處理
  參照文獻〔7,8〕報道的方法,首先吸入喘康速200 μg,超聲霧化吸入3%高滲鹽水(霧化量為0?4 ml/min),霧化時間為5~10 min。將病人咳出的痰收集於無菌乾燥的培養皿中,挑選出黏液部分放入無菌乾燥試管中稱重,加入4倍量0?1%DTT(二硫蘇糖醇),37℃水浴15 min,以有效溶解痰液,再加入4倍量磷酸鹽緩衝液(0?01 mol/L pH7?4 PBS)充分洗滌細胞5 min,2 000 r/min離心10 min。離心後的上清液-70℃儲存待測,沉澱留作痰細胞學檢查。
  1?2?3 痰液細胞計數及分類
  製備痰細胞學塗片2~3張,室溫下自然風乾,做HE染色。光學顯微鏡下進行細胞計數及分類,至少計數300個細胞,分類計數中性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞及嗜酸性粒細胞,檢查兩張塗片,取其平均數,得出各種細胞所佔百分率。