【摘要】 目的 建立氣相色譜法測定佛山人蔘再造丸中龍腦含量的方法。方法 採用HP?5石英毛細管柱(5% phenyl methyl siloxane)(30.0 m×320 nm×0.25 μm),柱溫為110 ℃,進樣口溫度為180 ℃,檢測器溫度為250 ℃, 載氣為氮氣。結果 龍腦檢測質量濃度在6.875～220.00 μg/mL (r=0.9999,n=6)範圍內線性關係良好,平均回收率為98.59%(RSD=1.52%)。
【關鍵詞】 氣相色譜法;佛山人蔘再造丸;龍腦;含量測定
Abstract:Objective To establish a method for content determination of borneol in Foshanrenshenzaizao pills. Method The sample was analyzed on an HP?5 capillary column (5% phenyl methyl siloxane, 30.0 m×320 nm×0.25 μm) using nitrogen as carrier gas. The temperatures of the column, injector and detector were 110, 180 and 250 ℃, lt There was good linearity in the range of 6.88?220.00 μg/mL (r=0.9999, n=6). The average recovery and relative standard deviation of borneol were 98.58% and 1.52%, respectively. Conclusion This method is simple, accurate and reproducible for the quality control of Foshanrenshenzaizao pill.
Key words:gas chromatography; Foshanrenshenzaizao pill; borneol
佛山人蔘再造丸是由人蔘、人工牛黃、血竭、當歸、冰片(合成龍腦)、大黃等組成的複方製劑，具有祛風化淤、活血通絡的功效，用於中風、步履艱難、口眼歪斜、手足痙攣、左癱右瘓、筋骨疼痛、半身不遂、言語不清[1]。處方中冰片(合成龍腦)是一味常用藥，具有散鬱火、清熱、消腫等功效。冰片(合成龍腦)主要成分是互為異構體的龍腦和異龍腦，其化學結構無特徵紫外吸收，因此薄層掃描法和氣相色譜法[2-4]是測定這類化合物較好方法。本文建立氣相色譜法測定佛山人蔘再造丸中龍腦的含量，方法簡便，雜質無干擾，分離效果好，結果準確，可作為該製劑質量控制的方法之一。
1、儀器與試藥
Agilent HP6890氣相色譜儀，HP Chemstatations工作站，FID檢測器;CQ 250超聲波處理器(上海,功率250 W，頻率33 kHz)。
龍腦(中國藥品生物製品檢定所，批號：110881?200504),水楊酸甲酯(中國藥品生物製品檢定所，批號：707?8702),佛山人蔘再造丸共10批(佛山馮了性藥業有限公司)，所用的其他試劑均為分析純。
2、方法與結果
2.1色譜條件與系統適用性試驗
色譜柱為HP?5石英毛細管柱(5% phenyl methyl siloxane)(30.0 m×320 nm×0.25 μm),柱溫為110 ℃,進樣口溫度為180 ℃,檢測器溫度為250 ℃,載氣為高純度氮氣,分流比為20∶1，在上述色譜條件下,龍腦、水楊酸甲酯(內標)的理論塔板數均大於40 000。龍腦與水楊酸甲酯(內標)的分離度大於2。
2.2溶液的製備
2.2.1內標溶液的製備精密稱取水楊酸甲酯適量, 置於1 000 mL容量瓶中，加入乙醇配製成濃度為0.130 0 mg/mL的溶液,搖勻,即得。
2.2.2對照品溶液製備精密稱取龍腦對照品適量，置於100 mL容量瓶中，加上述內標溶液溶解並稀釋至刻度，製成濃度為0.090 0 mg/mL的溶液,搖勻,即得。
2.2.3供試品溶液的製備取本品剪碎，取約2 g，精密稱定，加矽藻土2 g研碎，置於具塞錐形瓶中，精密加入上述內標溶液25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減少的重量，取續濾液，即得。
2.3測定方法
吸取對照品溶液按上述色譜條件注入氣相色譜儀，測定龍腦和水楊酸甲酯峰面積，計算校正因子;吸取供試品溶液按上述色譜條件注入氣相色譜儀，按內標法計算即得。
2.4線性關係考察
精密稱取龍腦對照品適量，加上述內標溶液稀釋至刻度，搖勻，製成濃度為220.00 μg/mL龍腦對照品溶液;精密吸取該對照品溶液5 mL置於10 mL的容量瓶中，加上述內標溶液稀釋至刻度，搖勻，製成濃度為110.00 μg/mL龍腦對照品溶液;同上逐級用內標液稀釋配製6個不同濃度梯度220.00、110.00、55.00、27.50、13.75、6.875 μg/mL的對照品溶液。吸取上述溶液,按上述色譜條件進樣，記錄其峰面積,並以龍腦質量濃度(ρ)為橫座標,龍腦峰面積與內標峰面積之比(A)為縱座標,進行線性迴歸,得迴歸方程A=0.012 4ρ-0.015 1(r=0.999 9,n=6)。結果表明龍腦檢測質量濃度在6.875～220.00 μg/mL範圍內線性關係良好。
2.5陰性干擾的考察
取缺冰片的處方，按工藝製成陰性製劑，按“2.2.3”項方法加乙醇超聲提取製得陰性對照溶液。分別吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液按上述色譜條件進樣分析。結果表明其他味藥及輔料對龍腦測定無干擾,見圖1。
圖1氣相色譜圖 略
2.6儀器精密度試驗
取同一供試品溶液(批號為GC0007)按上述色譜條件重複進樣6次，測定龍腦的`含量,結果龍腦含量的RSD為1.02%，表明儀器精密度良好。
2.7穩定性試驗
取同一供試品溶液，按上述色譜條件分別於0、1、2、4、6、8 h進樣測定，計算龍腦峰面積與內標峰面積之比的RSD為1.69%。結果表明供試品溶液在8 h之內穩定。
2.8重複性試驗
精密稱取同一批號(批號為GC0007)的樣品5份各2 g，按“2.2.3”項方法制得供試品溶液，測定每一份供試品含量，結果平均值為0.5972 mg/g,RSD=1.09%。結果表明本法重複性良好。
2.9加樣回收率試驗
取已測得含量的樣品(批號為GC0007，龍腦質量比為0.597 2 mg/g)6份各1 g，精密稱定，分別加入矽藻土1 g,研碎，各精密加入龍腦對照品溶液(質量濃度為0.6017 mg/mL)1 mL，按“2.2.3”項方法制得供試品溶液，測定，結果平均回收率為98.59%，RSD為1.52%。
2.10樣品測定
取10批樣品，分別按供試品的溶液製備方法制得供試品溶液，按“2.3”項測定，結果見表1。
表110批樣品測定結果 略
3、討 論
3.1參考文獻[2-4]提取溶劑選擇有乙醇、乙酸乙酯和氯仿等，內標物的選擇有萘和水楊酸甲酯。通過試驗比較,加矽藻土研碎，乙醇為提取溶劑，超聲提取(功率250 W，頻率33 kHz)，水楊酸甲酯為內標物，龍腦提取率明顯提高，乙醇的毒性、刺激性較小、價格較低且水楊酸甲酯與龍腦都具有良好的分離度,故採用乙醇為提取溶劑、超聲提取和水楊酸甲酯為內標物的方法。
3.2採用超聲提取法，試用不同的提取時間(20 min、30 min、40 min)對樣品進行提取，結果30 min與40 min樣品的含量較大而且無明顯差別，說明乙醇30 min的超聲提取樣品已經提取完全，為節約時間及節省成本，超聲提取時間確定為30 min。
【參考文獻】
[1] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方製劑[D].1994：113.
[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：化工工業出版社，2005：358，433，570,617，666.
[3] 魏學冰.氣相色譜法測定膚瘍軟膏中冰片的含量[J].中成藥,2004,26(1):76.
[4] 劉傑，董文玲.4種中藥橡膠膏劑中樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯的氣相色譜法測定[J].中成藥,2004,26(10):795.