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論文題目：血管生成素對黑色素瘤細胞生長及對鹼性成纖維
血管生成素基於其促血管發生活性,最早作為腫瘤血管生成因子被分離出來。已知血管生成素在血管內皮細胞中進行核轉移作用,在核仁中發生積累並刺激rRNA 的轉錄,進而誘發內皮細胞的增殖促進血管發生。目前對於血管生成素的研究主要集中在其如何誘發腫瘤的血管發生,進而促進腫瘤的進一步生長和惡化。本文中我們研究血管生成素在黑色素瘤細胞生長中的作用,並分析血管生成素對於另一血管生成因子bFGF表達及功能的影響。我們將血管生成素的基因分別以正向和反向轉入人黑色素瘤A375細胞中,得到了穩定的低表達和高表達血管生成素的細胞株。我們發現在轉入反義血管生成素基因的細胞株中,細胞的增殖受到了抑制,同時bFGF誘發的細胞增殖也受到了抑制,但是bFGF的表達水平卻提高了。相反,在轉染正義血管生成素基因的細胞株中,細胞的增殖提高了,同時bFGF誘發的細胞增殖也提高了,但是bFGF的表達水平下降了。另外我們利用免疫熒光實驗進行了血管生成素的核轉移分析,發現血管生成素在A375細胞中能夠進行核轉移作用。進一步的免疫透射電鏡實驗分析表明血管生成素進入細胞核後,其在核仁的分佈與rDNA的分佈及rRNA的合成區域相同,可能其作用與rDNA 相關。另外我們發現一種氨基糖苷類抗生素新黴素能夠抑制血管生成素在A375細胞中的核轉移作用。新黴素通過抑制血管生成素的核轉移作用進而抑制細胞的增殖。綜上,我們的結果表明血管生成素通過核轉移作用促進A375細胞的增殖,並且參與bFGF誘發的細胞增殖作用。所以血管生成素除了其具有血管發生活性而對黑色素瘤的生長髮揮重要作用外,還可以直接促進腫瘤細胞的增殖。而且我們還發現血管生成素對bFGF的`表達具有負調節作用。因此以血管生成素為靶點可能會找到治療黑色素瘤的新方法。
中文摘要3-4
英文摘要4-8
第一章 文獻綜述8-53
一、血管生成因子與腫瘤的關係8-37
(一) 血管生成簡介8
(二) 血管生成與腫瘤8-9
(三) 抗血管生成的腫瘤治療9-11
(四) 血管生成因子簡介11-30
(五) 血管生成因子對腫瘤的生長、轉移及預後的意義30-37
二、血管生成素的結構功能及與腫瘤的關係37-45
(一) 血管生成素的結構與性質37-38
(二) 血管生成素的生物學功能38
(三) 血管生成素的作用機制38-41
(四) 血管生成素與腫瘤41-42
(五) 血管生成素的抑制劑42-45
三、bFGF的結構功能及與腫瘤的關係45-49
(一) bFGF的結構與性質45-46
(二) bFGF的作用機制46-48
(三) bFGF的生物學作用48
(四) bFGF與腫瘤48-49
四、黑色素瘤的研究進展49-53
(一) 黑色素瘤簡介49
(二) 黑色素瘤與血管生成因子49-51
(三) 血管生成素在黑色素瘤中的表達及其作用51
(四) bFGF在黑色素瘤中的表達及其作用51
(五) 抗血管生成因子的黑色素瘤治療51-53
第二章 引言53-56
一、研究背景和立題依據53-55
二、本文的研究內容和意義55-56
第三章 實驗材料與方法56-70
一、實驗材料56-57
(一) 細胞和質粒56
(二) 主要試劑56
(三) 主要儀器56-57
二、實驗方法57-70
(一) 大量製備質粒的方法57-58
(二) 哺乳動物細胞培養58-59
(三) 哺乳動物細胞轉染59
(四) 哺乳動物細胞基因組的提取59-60
(五) 哺乳動物細胞總RNA的提取60-62
(六) 逆轉錄PCR (RT-PCR)62-63