【摘要】用超聲波提取法對三種植物葉進行單因素提取實驗，並用索氏提取法和微波提取法作了對比試驗，然後對超聲波提取法進行了正交試驗並確定了最優提取條件。得出不同植物葉中黃酮提取率最高的方法為超聲提取法，其最佳提取工藝分別為銀杏：70%乙醇，時間50 min，料液比1：20，溫度70 ℃。竹葉：70%乙醇，時間40 min，料液比1：22，溫度60 ℃。杜仲：50 %乙醇，時間40 min，料液比1：22，溫度60 ℃。通過該實驗對比得出不同植物中提取黃酮含量最高的方法為超聲波提取法，確定了不同植物中黃酮提取含量的最高的植物為竹葉。
【關鍵詞】黃酮 正交試驗 微波法 超聲提取波
一、材料與方法
(1)材料與儀器。樣品：銀杏葉、竹葉採自畢節，杜仲採自織金，均為2013年10月份採摘，洗淨，烘乾，粉碎，備用。
試劑：蘆丁標準品、乙醇(無水乙醇)、氫氧化鈉(分析純)、硝酸鋁(分析純)、亞硝酸鈉(分析純)
(2)標準曲線的繪製。取100度下乾燥之恆重的蘆丁15.26 mg，用50%乙醇配製濃度0.50 mg/mL的蘆丁標準品，取上述蘆丁標準溶液0 mL、l mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分別轉入25 mL容量瓶中，加l mL5%的NaN02，6 min後加入10%1 mLAI(NO3)3，6 min後加入10 mL 4%NaOH充分振盪搖勻，用蒸餾水定容至刻度，靜置30 min後，以蘆丁含量為0.000 mg/mL的標準溶液為參比，於500 nm處測定吸光度(Abs)，得迴歸方程：Y=9.3036X+0.0077，相關係數R2=0.9992。
(3)樣品黃酮含量的計算。吸取5ml的提取樣品至於25ml容量瓶中，按上述繪製蘆丁標準曲線的步驟配製提取溶液，測量提取液的吸光度A，按下面的公式計算出植物葉黃酮的含量：
黃酮含量
式中C一由測得的吸光值代入迴歸方程計算得到的黃酮濃度，mg/mL
V一溶液的體積，mL ; 為黃酮的百分含量;m為稱取樣品的質量，g
(4)索氏提取法提取不同種植物葉中黃酮類化合物。準確稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000 g於索氏提取儀中，在70%乙醇，時間2 h，料液比1：20的條件下，用100 mL乙醇進行索氏提取之無色，趁熱旋蒸濃縮，後冷凍12 h，過柱(活性炭和氧化鋁)除去葉綠素，置於50 mL容量瓶用50%乙醇定容[3]。按“1.2”方法測定吸光度，並根據標準方程和黃酮含量的計算公式求出不同植物中黃酮化合物的含量分別為：竹葉0.497%、銀杏0.746% 、杜仲0.629%。(對比試驗)
(5)微波提取法提提取不同種植物葉中黃酮類化合物。準確準確稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000 g，加入到圓底燒瓶中，在70%乙醇，時間50 min，功率400 W，溫度70 ℃的條件下，用100 mL乙醇進行微波提取，趁熱旋蒸濃縮，後冷凍12 h，過柱(活性炭和氧化鋁)除去葉綠素，置於100 mL容量瓶用50%乙醇定容[4]。按“1.2”方法測定吸光度，並根據標準方程和黃酮含量的計算公式求出不同植物葉中黃化合物的含量分別為：竹葉 0.660%銀杏0.866% 杜仲1.165%。(對比試驗)
(6)超聲波提取法提取不同種植物葉中黃酮類化合物。準確稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000g，加入到圓底燒瓶中，用不同的乙醇濃度、超聲時間、料液比、超聲溫度分別進行單因素影響實驗。 為全面考察超聲波取法提取不同種植物葉中黃酮類化合物的影響因素[5]，在單因素實驗的基礎上，選取各單因素的最優條件，設計正交實驗L9(34)，確定植物葉黃酮的最佳提取條件。
二、結果與分析
2.1 超聲波提取單因素實驗
(1)乙醇濃度對黃酮提取的影響 稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000 g ，分別用濃度為30%、50%、70%、95%的乙醇溶液在50 ℃ ，料液比(g：mL)1：20 ，超聲波功率50 Hz提取30 min ，趁熱旋蒸濃縮 ， 加石油醚萃取葉綠素，後用50%乙醇稀釋定容至50 mL ，測定其吸光值 ，得黃酮含量與乙醇濃度之間的關係，實驗結果見圖1。
圖1乙醇濃度對黃酮含量的影響
由圖1可知，銀杏葉在乙醇濃度為70%時，總黃酮的含量最高，之後趨於平緩，因此乙醇濃度為70%為最佳。竹葉在70%時，總黃酮含量最高，之後下降，所以70%為竹葉最佳的乙醇提取濃度。杜仲葉在30%～50%時黃酮含量呈上升趨勢，50%～95%趨於下降，所以50%為最佳提取濃度。
(2)提取時間對黃酮提取的影響 稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000 g ，分別以30 min、40 min、50 min、60 min的不同提取時間在50 ℃ ，料液比(g：mL )1：20 ，50 Hz超聲波提取。趁熱旋蒸濃縮 ， 加石油醚萃取葉綠素，後用50%乙醇稀釋定容至50 mL ，測定其吸光值 ，得黃酮含量與提取時間之間的關係，實驗結果見圖2。
圖2提取時間對黃酮含量的影響
由圖2可以看出，銀杏葉在40 min時黃酮提取含量值較高，故最佳提取時間為40 min為宜。竹葉在40 min黃酮提取含量值達到最高，往後趨於下降，所以最佳提取時間為40 min最佳。杜仲葉在30 min～50 min黃酮提取含量值上升明顯，60 min明顯下降，故50 min為最佳。
(3)不同料液比對黃酮提取的影響 稱取竹葉、銀杏、杜仲葉粉末各5.000 g ，分別以1：16、1：18、1：20、1：22的不同料液比(g：mL )在50 ℃ ，50 Hz超聲波提取30 min。趁熱旋蒸濃縮 ， 加石油醚萃取葉綠素，後用50%乙醇稀釋定容至50 mL ，測定其吸光值 ，得黃酮含量與料液比之間的關係，實驗結果見圖3。 圖3不同料液比對黃酮含量的影響
由圖3可以看出銀杏、竹葉、杜仲在1：18處黃酮含量值達到最大，往後或趨於平衡或下降，即在1：18為最佳提取料液比。
(4)不同溫度比對黃酮提取的影響 稱取竹葉、銀杏、杜仲粉末各5.000 g ，分別在40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃下 ，以料液比為1：20(g：mL )，50 Hz 超聲波超聲提取30 min。趁熱旋蒸濃縮 ， 加石油醚萃取葉綠素，後用50%乙醇稀釋定容至50 mL ，測定其吸光值 ，得黃酮含量與溫度之間的關係，實驗結果見圖4。
圖4不同溫度比對黃酮含量的影響
由圖4可以看出，銀杏葉提取黃酮含量的值隨著溫度升高而增大，到60 ℃後趨於平緩，故60 ℃為最佳提取溫度。竹葉在50 ℃黃酮提取含量最高，往後隨溫度升高而下降，所以50 ℃為銀杏最佳提取溫度。杜仲黃酮提取含量隨溫度升高而增大，在60 ℃後增大不明顯，杜仲的最佳提取溫度為60 ℃～70 ℃。