【摘要】 目的優選鼻淵靈顆粒劑的提取工藝。方法以黃芩苷為指標，採用高效液相色譜法測定黃芩苷含量；用正交實驗L9(34)優選鼻淵靈顆粒劑的最佳提取工藝。結果黃芩苷在0.177 2 ～1.772 0 μg範圍內線性關係良好（r＝0.999 4，n＝7）,平均回收率為99.3 % , RSD =2.26 % (n = 6)；優選的提取工藝為：以10倍藥材量的水提取3次，1 h/次，醇沉濃度為50%。結論建立的含量測定方法準確、重複性好，優選出的提取工藝穩定、合理、可行。
【關鍵詞】 鼻淵靈顆粒劑 黃芩苷 正交實驗 提取工藝 反相高效液相色譜法
鼻淵靈顆粒劑是治療鼻淵的'有效方藥，由黃芩、白芷、蒼耳子等組成。黃芩苷是黃芩中具有抗菌作用的活性成分, 亦是鼻淵靈顆粒劑中的主要有效成分。為了提高黃芩苷得率，我們用正交實驗法對影響黃芩苷提取條件如提取次數、煎煮時間、加水量、醇沉濃度等進行了研究, 探索適合工業化生產、工藝操作簡單、得率高的提取工藝。現報道如下。
1 儀器與材料
1.1 儀器日本島津高效液相色譜系統SPD-10AVD，SPD-10A VP紫外檢測器，手動進樣器，N2010 色譜工作站；1810－BC石英自動雙重純水蒸餾器（江蘇省金壇市白塔石英玻儀廠）；TD200/型電子天平（天津天平儀器有限公司）；TG328B型分析天平（上海精科儀器廠）；KQ-250B型超聲波清洗機（上海必能信超聲有限公司）。
1.2 材料黃芩苷對照品（中國藥品生物製品檢定所，批號110715-200514）；甲醇（色譜純，天津市康科德科技有限公司）；磷酸（分析純，開封化學試劑總廠）；水為自制新鮮雙蒸水。
黃芩、白芷、鵝不食草、蒼耳子、藿香、薄荷等藥材均購於石家莊樂仁堂藥房，經鑑定符合2005版《中國藥典》規定。
2 方法與結果
2.1 正交實驗設計［1］根據預實驗結果，影響提取工藝的主要因素有：加水量，提取次數，提取時間，醇沉濃度。本實驗採用L9(34)正交表安排實驗。以黃芩苷含量為指標，對鼻淵靈的提取工藝進行優選。因素水平表見表1。
2.2 樣品提取液的製備按正交表的實驗安排，依處方比例稱取各味藥材，加水浸泡30 min，煎煮、合併提取液，靜置過夜，濾過，上清液濃縮成流浸膏，放至室溫，醇沉，減壓抽濾，濾液回收乙醇至無醇味，調整至每毫升藥液含原藥材1 g，得樣品提取液。
表1 因素水平（略）
2.3 含量測定
2.3.1 色譜條件固定相為迪馬公司Diamonsil ODSC18反相柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇∶水∶磷酸（53∶47∶0.2,V/V/V）；流速1.0 ml/min ；檢測波長274 nm；柱溫為室溫；進樣量20 μl，理論塔板數按黃芩苷計不低於2 500。
2.3.2 對照品溶液的製備［2］精密稱取60℃真空乾燥4 h的黃芩苷對照品4.43 mg，置 50 ml 棕色容量瓶中，加入甲醇，超聲處理20 min，放至室溫，用甲醇定容，混勻，得0.088 6 mg/ml 對照品溶液。
2.3.3 線性關係考察 精密量取對照品溶液1.0，2.0，2.5，5.0，7.5 ，8.0 ，10.0 ml置10 ml棕色容量瓶中，加入甲醇，超聲處理20 min，放至室溫，再用甲醇定容，進樣前用0.45 μm微孔濾膜過濾，測定峰面積。以峰面積（Y）對進樣量（X）作圖，得迴歸方程為：Y＝32 689 834X－43 715（r＝0.999 4，n＝7）。結果表明，黃芩苷進樣量在 0.177 2 ～1.772 0 μg範圍內呈良好線性關係，最低檢測限為0.177 2 μg。
2.3.4 精密度實驗精密量取對照品溶液7.5 ml，置10 ml棕色容量瓶中，加入甲醇，依法處理。連續進樣5次，測定峰面積。以峰面積大小計算RSD=0.166% (n=5)，結果表明本測定系統精密度良好。
2.3.5 重複性實驗取對照品溶液5份，每份1.0 ml，置10 ml棕色容量瓶中，加入甲醇，依法處理，進樣，測定峰面積。以黃芩苷含量計算RSD=0.08%(n=5)，重複性良好。
2.3.6 穩定性實驗精密吸取同一份供試液，依法於室溫下0，1.0，4.0，8.0，12.0，24.0 h進樣，測定峰面積，計算RSD＝0.63％（n=6）。表明本檢測系統條件下，供試品溶液24 h內穩定性良好。
2.3.7 加樣回收率實驗平行精密吸取6份已知含量的供試品原液1 ml，置10ml棕色容量瓶中，分別加入黃芩苷標準品溶液（0.088 6 mg/ml ）3.0，3.0，3.8，3.8，4.6，4.6 ml，加入甲醇，依法處理，在上述色譜條件下進行檢測。測得6個樣品的加樣回收率分別為96.2%，101.9%，101.5%，98.5%，97.6%，100%，平均加樣回收率為99.3%，RSD=2.26%。
2.3.8 樣品測定精密吸取1～9號供試液各1.0 ml，依法處理，按“2.3.1”項下色譜條件檢測。正交實驗結果見表2，方差分析結果見表3。
表2 L9(34)正交實驗結果（略）
表3 方差分析（略）
由表2可見，以黃芩苷的提取總量為指標，各因素中影響大小為A>C>B>D,即提取次數>加水量>提取時間>醇沉濃度，最佳提取條件為A1B2C3D2，即提取3次，每次提取60 min，加水量為10倍，醇沉濃度為50%。方差分析表明，提取次數和加水量為顯著因素（P<0.05）。
2.4 驗證實驗依處方比例稱取藥材3份，按優選出的提取工藝，照“2.2”項下平行製備樣品提取液，在上述色譜條件下測定黃芩苷的含量，每個樣品進樣兩次，求平均值。測得3批樣品的濃度分別為0.053 215，0.056 524，0.052 684 mg/ml，平均濃度為0.054 141 mg/ml，均高於正交實驗各樣品濃度，說明本最佳提取工藝合理。
3 討論
在含量測定中，為了提高黃芩苷的溶解性，需要超聲處理。由於超聲波本身會使溶液溫度升高，而甲醇的膨脹係數較大，且易揮發，所以要注意保持恆溫，被超聲物要在密封情況下進行處理，最後再用甲醇定容。
【參考文獻】
［1］ 黃祖良,劉勝娟.用正交試驗法優選黃芩苷浸提工藝［J］. 廣西中醫學院學報,2001,4(2):74.