【關鍵詞】 糖尿病；微血管病變；血小板膜糖蛋白；流式細胞術
糖尿病(DM)與遺傳、自身免疫及環境等多種因素有關。糖尿病腎病(DN)是DM的一種嚴重血管併發症，是引發DM患者死亡的主要原因之一。在疾病的慢性程序中，迴圈血中處於靜息狀態的血小板在各種理化和生物因子的作用下，使血小板內的顆粒膜糖蛋白和質膜糖蛋白迅速發生數量重排和構型變化而啟用成為活化血小板。檢測活化血小板方法有血小板凝集試驗、血小板第4因子(FP4)和β血小板球蛋白(βTG)測定，但這些方法只能半定量，難以標準化，不能測定血小板活化量〔1〕。隨著單株抗體和流式細胞儀的應用，檢測血小板表面活化相關抗原的表達能夠反映血小板活化，大大提高試驗的特異性和敏感性。本文通過流式細胞術(FCM)檢測DM患者血漿中CD62p和CD63的`陽性表達率，以探討其臨床意義。
1 材料與方法
1?1 物件
按WHO DM診斷標準〔2〕確診的DM患者158例，其中男80例，女78例，年齡56～81(平均62?21±10?46)歲。所有病例病程穩定，無急性代謝紊亂，無肝病、腫瘤及風溼性疾病，近期無使用影響腎功能的藥物，未服用雙嘧達莫、腸溶阿司匹林、複方丹蔘等抗血小板藥物。根據白蛋白排洩率(AER)將其分為①單純性DM組(DM組)：AER ＜20 μg/min，40例，男性18例，女性22例，年齡為59～74(平均64?10±8?33)歲；②DN微量白蛋白組(DNⅠ組)：AER 20～200 μg/min，49例，男性24例，女性25例，年齡為56～79(平均63?76±8?67)歲；③DN大量白蛋白組(DNⅡ組)：AER ＞200 μg/min，43例，男23例，女20例，年齡57～81(平均63?18±10?03)歲；④DN尿毒症組(尿毒症組)：其腎功能減退已達到尿毒症期，26例，男性15例，女性11例，年齡為63～77(平均66?30±7?41)歲。對照組：45例，男性21例，女性24例，年齡56～77(平均63?27±9?82)歲，排除DM、高血壓、冠心病、高血脂症、泌尿系感染、內分泌疾病及肝腎疾病的健康體檢者。
1?2 儀器及試劑
EPICS XL型流式細胞儀為美國Beckman coulter公司生產。流式細胞儀校正微球(Flow check)由美國Beckman coulter公司提供(批號：1683)。熒游標記單株抗體：藻紅蛋白(PE)標記的McAb(CD62p?PE，批號：1597；CD63?EP，批號：1923；免疫陰性對照MouseIgG1?EP,批號：1607)均為法國Immunotech公司產品。
1?3 方法
1?3?1 標本準備
採集靜脈血3 ml，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA?K2)抗凝離心(800 r/min，10 min)，吸上層血漿500 μl於乾淨試管中，加入等量的2?5%多聚甲醛500 μl混勻，15 min後加磷酸鹽緩衝液(PBS)2 ml，離心(1 500 r/min,10 min)洗滌3次，然後用PBS將其調節成血小板濃度為3×109L-1的血小板懸液。取3支幹淨的塑料試管，各管加入血小板懸液100 μl，再分別加入20 μl CD62p、CD63及鼠IgG1，避光反應15 min，然後各管加1 ml PBS，混勻待測。
1?3?2 上機測定
流式細胞儀上機檢測前用配機提供的校正微球進行流路和光路的校正，上機計數2×104個血小板，血小板CD62p及CD63含量以其陽性細胞百分率表示。
1?4 統計學處理
採用t檢驗。
2 結果
CD62p、CD63的陽性表達率DM組明顯高於對照組(P＜0?01)，DN組較DM組明顯增高(P＜0?01)，尿毒症組則明顯低於對照組(P＜0?01)，見表1。表1 各組血小板CD62p、CD63結果比較(略)